Aislación y caracterización de las células epiteliales del amnios / Isolation and characterization of amniotic ephitelial cells

RESUMEN: Las células epiteliales del amnios (hAECs) son células madre pluripotenciales; tienen capacidad de diferenciarse en células de las tres capas embrionarias. Como tales, se utilizan en algunas terapias regenerativas en medicina. Este estudio tiene por objetivo describir un protocolo de aislación de las células epiteliales del amnios (hAECs) a partir de placentas humanas de partos por cesárea, así como su caracterización y comportamiento in vitro. Se aislaron hAECs de 20 placentas de partos por cesárea con un protocolo optimizado. Se caracterizaron las células mediante citometría de flujo, microscopia óptica y de fluorescencia, y se evaluó la proliferación de las células mediante MTT a los 1, 3, 5 y 7 días con y sin β-mercaptoetanol en el medio de cultivo. El análisis histológico del amnios mostró un desprendimiento prácticamente completo de las células después de la segunda digestión del amnios. El promedio de células obtenidas fue de 10.97 millones de células por gramo de amnios. Las hAECs mostraron una proliferación limitada, la cual no fue favorecida por la adición de β-mercaptoetanol en el cultivo. Se observó un cambio de morfología espontanea de epitelial a mesenquimal después del cuarto pasaje. Las células epiteliales del amnios pueden ser aisladas con un protocolo simple y efectivo, sin embargo, presentan escasa capacidad proliferativa. Bajo las condiciones de este estudio, la adición de β-mercaptoetanol no favorece la capacidad proliferativa de las células.

SUMMARY: human amnion epithelial cells (hAECs) are pluripotent stem cells; they have the ability to differentiate into cells of the three embryonic layers, and are used in various regenerative therapies in medicine. This study aims to describe a protocol for the isolation of amnion epithelial cells (hAECs) from human placentas from cesarean delivery, as well as their characterization and culture conditions in vitro. hAECs were isolated from 20 cesarean delivery placentas with an optimized protocol. The cells were characterized by flow cytometry, light and fluorescence microscopy, and the proliferation of the cells was evaluated by MTT at 1, 3, 5 and 7 days with and without β-mercaptoethanol in the culture medium. Histological analysis of the amnion showed a practically complete detachment of the cells of the underlying membrane after the second digestion. The average number of cells obtained was 10.97 million cells per amnion. The hAECs perform a limited proliferation rate, which was not favored by the addition of β-mercaptoethanol in the culture. A spontaneous morphology change from epithelial to mesenchymal morphology is exhibited after the fourth passage. The epithelial cells of the amnion can be isolated with a simple and effective protocol, however, they present little proliferative capacity. Under the conditions of this study, the addition of β-mercaptoethanol does not favor the proliferation of the cells.

Micro-computed tomographic analysis of apical foramen enlargement of mature teeth: a cadaveric study / Análisis mediante micro-CT del ensanchamiento del foramen apical de dientes maduros: un estudio cadavérico

Revitalization procedures have been extensively studied during the last decade and offers several advantages over root canal treatment, such as the recovery of the natural immune system. Mature teeth have a small apical foramen diameter (AFD), which could impair the ingrowth of tissue into the root canal. We analysed three methods for apical foramen enlargement by instrumentation in in situ human teeth and evaluated the damage over hard tissues produced by the techniques. Tooth length (TL), defined as the length from the most coronal part of the crown to the point at which the file abandons the root canal, was calculated. Forty-four in situ teeth were randomized: Group I: instrumentation 0.5 mm coronal to TL; Group II: at TL level; Group III: 0.5 mm beyond TL. Teeth were instrumented up to K-file #80. The mandibles were scanned in a micro-CT device before and after treatment. Group I: Only 20 % of teeth presented an enlarged AFD, with augmentation of 0.09 mm. No damage to hard tissues was observed. Group II: 71.4 % of the teeth presented an enlarged AFD with augmentation of 0.42 mm. 35.7 % presented damage to periapical tissues. Group III: 86.7 % presented an enlarged AFD with augmentation of 0.43 mm. 46.7 % presented damage to periapical tissues. All groups presented similar prevalence of teeth with dentine thickness less than 1mm. All mandibular incisors presented areas of thickness less than 1mm. Instrumentation 0.5 mm beyond TL is the most effective technique.

La revitalización de dientes necróticos ha sido ampliamente estudiada durante la última década y ofrece varias ventajas sobre la endodoncia convencional, tal como la recuperación del sistema inmunitario natural del diente. Los dientes maduros tienen un diámetro de foramen apical (FA) pequeño, lo que podría afectar el crecimiento de tejido en el conducto. Se evaluaron tres métodos para la ampliación del foramen apical en dientes humanos in situ y se evaluó el daño sobre los tejidos duros producidos por las técnicas. Mediante radiografía periapical se calculó la longitud del diente (TL), definida como la longitud desde la parte más coronal de la corona hasta el punto en que la lima abandonó el conducto radicular. En el estudio fueron aleatorizados 44 dientes in situ: Grupo I: instrumentación 0,5 mm coronal a TL; Grupo II: a nivel TL; Grupo III: 0,5 mm más allá de TL. Los dientes fueron instrumentados hasta la lima K #80. Las mandíbulas se escanearon en un dispositivo de microCT antes y después del tratamiento. Grupo I: solo el 20 % de los dientes presentaron un diámetro de FA ensanchado, con un aumento de 0,09 mm. No se observó daño a los tejidos duros. Grupo II: el 71,4 % de los dientes presentaban un FA ensanchado con un aumento de 0,42 mm. El 35,7 % presentó daño a los tejidos periapicales. Grupo III: el 86,7 % presentó un FA ensanchado con un aumento de 0,43 mm. El 46,7 % presentó daño a los tejidos periapicales. Todos los grupos presentaron una prevalencia similar de dientes con un espesor de dentina inferior a 1mm. Todos los incisivos mandibulares presentaban áreas de grosor inferior a 1mm. La instrumentación 0,5 mm más allá de TL es la técnica más efectiva, aunque se debe tener especial consideración en aspectos como el debilitamiento de la estructura dentaria.